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Taq酶双封闭抗体封闭原理

2022-09-01 10:03:30

热启动Taq酶 传统的Taq DNA聚合酶抗体可以有效抑制Taq酶的聚合酶活性,从而避免错配或引物二聚体引起的非特异性扩增。

热启动Taq酶

然而Taq酶除了具有5'→3'聚合酶活性,还有5'→3'核酸外切酶活性,这部分外切酶活性可能会在低温时导致错配探针或其它物料降解,造成非特异信号。开发的热启动Taq酶双封闭抗体不仅可以封闭Taq酶的有5'→3'聚合酶活性,还能同时封闭Taq酶的5'→3'外切酶活性,双管齐下,既能有效防止错配或引物二聚体引起的非特异性扩增,又能防止物料降解产生非特异信号,双重提升试剂的稳定性。

Taq酶双封闭抗体不仅可封闭野生型Taq酶,对于多种突变体Taq酶亦可适用,封闭之后的热启动Taq酶可以正常保存至-20℃。

1 µL抗体(5 mg/mL)可封闭20-50 U Taq DNA聚合酶:

•  小样室温(25℃)旋转混匀孵育30 min

•  大样室温(25℃)旋转混匀孵育2~3 h

用传统封闭抗体与双封闭抗体分别封闭Taq DNA聚合酶,配置成含引物探针的全预混液,在4℃放置10天或在37℃放置1、3、5天,扩增10000拷贝ASFV质粒,观察扩增曲线和Ct值变化,对比传统封闭抗体和双封闭抗体对全预混反应液稳定性的作用。


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