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哪种Taq酶更适合您?

2022-08-20 10:25:39

热启动Taq酶  随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入,PCR已成为一门相当成熟的常规技术,而热聚合酶(即Taq酶)的合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。目前市面上有多种Taq酶,能够满足多方面的实验需要。那么,如何选择合适的Taq酶?我们在这里总结了三种Taq酶的性质和用途,方便用户选择。

热启动Taq酶

高特异性Taq酶

可高度特异性地扩增所需的片段是PCR基本的要求,影响PCR特异性的因素很多,包括模板、引物性质及质量、反应条件的控制等等,而高特异性Taq酶的出现大大减少了摸条件这一繁琐的实验过程,也为PCR产物快速有效的纯化(PCR产物直接纯化)打下了基础。这类酶典型的代表是热启动Taq酶。

大家都知道,在PCR第 一个循环变性之前,有一个升温的过程,引物和模板会有一些非特异性配对,如果这时Taq酶发挥活性,就很容易产生非特异性扩增,由于循环初期模板量非常少,产生的非特异性条带经过后面的指数扩增,就会严重干扰目的片段的扩增,甚至导致特异性条带不能扩出。而热启动Taq酶是必 需 经过高温才能激活的酶,因此在初始循环的变性之前它没有活性,不会产生非特异性扩增,这就大大提高了PCR扩增的特异性。

高保真Taq酶

下游应用为基因筛选、测序、突变检测,分子诊断等等的用户,往往对PCR保真性要求很高,保真性的一个通用标准是错配率,错配率越低保真性越好。普通Taq酶的错配率在2-5X10-5碱基/循环数,而高保真Taq酶错配率可达10-6数量级,大大降低了出错的可能。其原理主要是因为高保真Taq酶具有3‘到5’核酸外切酶(Proofreading)的活性,扩增途中如果产生了错配的碱基,它可以将其切掉,从而保证了扩增的准确性。

需要提醒用户的是由于此酶具有核酸外切酶功能,往往扩增效率低一些,有的还容易降解引物,且产物一般不宜用TA或UA克隆法克隆。目前市面上主要有两类产品,一类是混合型的高保真酶,将带有Proofreading活性的酶与普通Taq酶(用于提高扩增效率)混合起来,错配率在8-9X10-6碱基/循环数。如果要求更高的保真度,就要选择单一型的高保真酶。

高耐热性Taq酶 

对于有些模板变性温度较高,需要时间较长的用户,可能要求高耐热性Taq酶。


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