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DP001-02-03 质粒小提试剂盒

DP001-02-03 质粒小提试剂盒

  • 所属分类:基础科研试剂
  • 浏览次数:
  • 发布时间:2021-11-11 07:55:53
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产品参数

产品介绍

质粒小提试剂盒

(离心柱型)

货号:DP001         规格:100T/200T      保存:室温(RNase A -20℃保存)

产品说明:

本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,根据离心吸附柱在高盐状态下特异性结合溶液中DNA的原理特异性提取质粒DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。


产品组成:

试剂盒组成

DP001-02(100T)

DP001-03(200T)

保存温度

RNase A

500μl

1000μl

-20℃
溶液Ⅰ

30ml

60ml

RT

溶液Ⅱ

30ml

60ml

溶液Ⅲ

40ml

80ml

漂洗液

15ml×2

30ml×2

洗脱液

30ml

60ml

吸附柱100个

200个

收集管

100个

200个


储存条件:

该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月。RNase A -20℃长期保存,2-8℃可稳定保存。若溶液产生沉淀,可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。溶液在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的RNaseA全部加入),混匀,置于2-8℃保存。单独包装的RNase A -20℃稳定保存12个月以上。

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤:

1. 1-5mL细菌培养物,12000rpm离心1min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。

2. 向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL溶液请先检查是否已加入RNase A,使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3. 向离心管中加入250μL溶液,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:混匀一定要温和,以免打断细菌基因组DNA进而造成污染,此时菌液应变得清亮黏稠,作用时间不要超过5min,以免质粒受到破坏。

4. 向离心管中加入350μL溶液,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm离心10min,用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中,尽量不要吸出沉淀。注意:溶液加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。

5. 将上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱加入收集管中),室温放置2min12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

6. 向吸附柱中加入700μL漂洗液使用前请先检查是否已加入无水乙醇12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

7. 向吸附柱中加入500μL漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放收集管。

8. 12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温放置数分钟,目的是去除吸附柱中残余的漂洗液,否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR等。

9. 将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200μL65℃水浴预热的洗脱液,室温放置2min12000rpm离心1min

10. 为了增加质粒的回收效率,可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中,室温放置2min12000rpm离心1min提取获得的质粒DNA经浓度及纯度检测后于-20℃保存。

注意事项(在使用本试剂盒前请阅读此注意事项):

1. 使用前请先检查溶液和溶液是否出现混浊,如有混浊现象,可37℃水浴待溶液恢复澄清后再使用。溶液、溶液和漂洗液使用时避免直接接触,后应立即拧紧盖子。

2. 洗脱缓冲液体积不应少于50μL,体积过小影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右可用NaOH将水的pH值调至此范围pH值低于7.0会降低洗脱效率,提取产物应保存在-20℃,以防降解。

3. 如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用5-10mL过夜培养物,同时按照比例增加溶液、溶液和溶液的用量,吸附和洗脱时可以适当地延长时间,以增加提取效率。

4. 浓度及纯度检测:得到的质粒DNA纯度可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计进行检测,其与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50μg/mL双链DNA40μg/mL单链DNAOD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响吸光值,但并不表示纯度低。


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