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荧光定量PCR检测仪-PCR检测仪原理

2022-10-12 17:08:48

实时荧光定量PCR仪  荧光定量PCR检测仪-PCR检测仪原理

PCR检测仪是一种实时检测反应的分析仪器。事实上,养殖业的朋友或家里养宠物的朋友对它并不陌生。PCR检测仪有很多用途,可以检测各种动物病害,包括鱼虾病害和非洲猪瘟。PCR检测仪是现在常用的监测仪器,PCR检测仪适用于基于能力的仪器PCR检测仪在产物生成过程中,可以对产物进行任何实时标记荧光反应PCR病原体、突变等检测。

实时荧光定量PCR仪

PCR检测仪封闭的反应系统将污染降到低。PCR检测仪可以对SNP细胞分析与快速筛选、细胞分析与快速筛选、RNA水平检测与量化等。所以PCR检测仪可以广泛用在各个领域,可以应用在转基因监测、水体监测、动物疫病等。非洲猪瘟检测就可以使用PCR检测仪进行检测。

PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的,随着反应循环数的增加,终PCR反应不再以指数方式生成模板,从而进入平台期。在传统的PCR 中,常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的扩增产物,因此用此终点法对PCR产物定量存在不可靠之处。在real-time Q-PCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号,随着反应时间的进行,监测到的荧光信号的变化可以绘制成一条曲 线。在PCR反应早期,产生荧光的水平不能与背景明显地区别,而后荧光的产生进入指数期、线性期和平台期,因此可以在PCR反应处于指数期的某一点 上来检测PCR产物的量,并且由此来推断模板的含量。为了便于对所检测样本进行比较,在real-time Q-PCR反应的指数期,首先需设定一定荧光信号的域值,一般这个域值(threshold)是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 (baseline),荧光域值的缺省设置是3~15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。如果检测到荧光信号超过域值被认为是真 正的信号,它可用于定义 样本的域值循环数(Ct)。Ct值的含义是:每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。研究表明,每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的 对数存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,因此只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样 品的起始拷贝数。


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