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铜陵市分子诊断试剂原材料标准

发布时间:2023-03-09 01:33:41
铜陵市分子诊断试剂原材料标准

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随着对动物检疫工作的发展与完善,仅依靠兽医的经验检查已经不能满足现今动物疫病诊断的需求,因此,病理化验室开始发挥重要作用.如蓝耳病的病原学检测方式需要采集病猪的扁桃体,淋巴结,肺,肝,脾等,利用10%的中性福尔马林进行固定,经过石蜡切片,HE染色之后使用光镜对样本进行病理学组织检查得出结论,又如猪瘟的病理学检查方式主要有免疫荧光实验,酶联免疫吸附实验,核酸探针技术,基因芯片检测技术等.

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热启动PCR(hot start PCR)是指使Taq DNA 聚合酶只有在样品温度至少超过70℃时才发挥作用的PCR,可提高反应的特异性。Taq DNA 聚合酶通常在比适宜温度低得多的条件下仍有较强的活性。PCR 反应的初加热过程中,样品温度上升到70℃之前,在较低的温度下引物可能与部分单链模板形成非特异性结合,并在Taq DNA 聚合酶的作用下延伸。结果会导致非靶序列的扩增,影响反应的特异性。热启动可减少非靶序列的扩增,提高反应的特异性。在引物设计时如果某位点因为遗传元件的定位而受限,如site-directed 突变、表达克隆或用于DNA 工程的遗传元件的构建和操作等情况,热启动PCR 尤为有效。

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分子诊断中游主要是分子诊断试剂和仪器两类产品的研发、生产和销售,国内试剂发展较为迅速,而国产仪器占比相对较小。 分子诊断试剂盒包括核酸提取试剂盒和核酸检测试剂盒,基本已经国产化。HBV(乙肝病毒)、HCV(丙肝病毒)、HIV(艾滋病毒)等常见病毒的核酸检测试剂国内生产厂家数均远大于国外厂家。甲型、乙型、丙型流感等常见疾病的核酸检测试剂盒已经比较成熟,竞争厂家较多,几乎全部为国产品牌。

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在动物疫病诊断标准等技术规范中,酶联免疫吸附试验对试验中加底物的反应步骤进行规定,规定固定的时间,然后加终止液。但是,在许多酶联免疫吸附试验中,加底物的反应步骤需要根据阴性、阳性对照反应情况对反应的时间进行调整。如当阴性与阳性对照的反应结果出现后,实验人员则可以加终止液。有关资料规定的时间可能太长或者太短,这样会对反应的结果产生影响。如果加底物的反应时间较长,样品则有可能呈现阳性,易导致误诊情况的产生。

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高致病性禽流感:对全国所有鸡、鸭、鹅、鹌鹑等人工饲养的禽类,根据当地实际情况,在科学评估的基础上选择适宜疫苗,进行H5亚型和(或)H7亚型高致病性禽流感免疫。对供研究和疫苗生产用的家禽、进口国(地区)明确要求不得实施高致病性禽流感免疫的出口家禽,以及因其他特殊原因不免疫的,有关养殖场(户)逐级报省级农业农村部门同意后,可不实施免疫。

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热启动Taq酶的产生:在PCR的反应过程中,主要有三个阶段:变性、复性、延伸。Taq DNA聚合酶的复性温度是72℃,但其在低温下也有活性(活性较弱),也能催化引物与模板复性,只是错配率高,发生非特异性复性机率大。这样在未达到72℃之前,反应在Taq酶聚合下不断扩增出非特异性产物,而使实验失败。在传统的PCR反应中,这样由低温上升至高温的过程中,引物错配和二聚体的形成机率非常高,Hot Start Taq DNA聚合酶就是让PCR反应一开始就在大于70℃下进行。当温度较低时,酶活性被封闭,当温度大于一定温度时酶又开始工作。这样就避免了在低温下复性、延伸的过程,消除引物错配和二聚体形成,减少非特异性产物的产生。我们是如何对Hotstart Taq酶修饰而让它只在高温下才能发挥活性?这就是Hot Start taq酶的作用原理。