佳木斯市热启动Taq酶优质
发布时间:2023-03-05 01:33:38佳木斯市热启动Taq酶优质
人们生活水平不断提升,对食品质量安 全提出更高的要求,检疫工作不断深入与完善,仅依靠感观检查已远不能满足当今工作的需要,须使病理化验室发挥的作用.为更好地配合产地检疫,屠宰检疫及农贸市场的肉食品检疫,根据《动物防疫法》,《食品卫生法》,《定点屠宰管理办法》及相关法律法规的精神,结合实际工作需要,高度重视动物的防疫工作.而动物疫病的诊断离不开先进的技术和设备,该文主要围绕动物疫病诊断化验室操作中常见的问题进行分析.
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分子诊断中游主要是分子诊断试剂和仪器两类产品的研发、生产和销售,国内试剂发展较为迅速,而国产仪器占比相对较小。 分子诊断试剂盒包括核酸提取试剂盒和核酸检测试剂盒,基本已经国产化。HBV(乙肝病毒)、HCV(丙肝病毒)、HIV(艾滋病毒)等常见病毒的核酸检测试剂国内生产厂家数均远大于国外厂家。甲型、乙型、丙型流感等常见疾病的核酸检测试剂盒已经比较成熟,竞争厂家较多,几乎全部为国产品牌。
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制定免疫计划。各省份按照本意见要求,结合防控实际(含计划单列市工作需求),制定本辖区的强制免疫计划,报农业农村部畜牧兽医局备案,抄送中国动物疫病预防控制心,并在省级农业农村部门门户网站公开。对散养动物,采取春秋两季集中免疫与定期补免相结合的方式进行,对规模养殖场(户)及有条件的地方实施程序化免疫。实行“先打后补”。各省份可采用养殖场(户)自行免疫、第三方服务主体免疫、政府购买服务等多种形式,推进“先打后补”工作,在2022年年底前实现规模养殖场(户)全覆盖,在2025年年底前逐步停止政府招标采购强制免疫疫苗。
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高致病性禽流感:对全国所有鸡、鸭、鹅、鹌鹑等人工饲养的禽类,根据当地实际情况,在科学评估的基础上选择适宜疫苗,进行H5亚型和(或)H7亚型高致病性禽流感免疫。对供研究和疫苗生产用的家禽、进口国(地区)明确要求不得实施高致病性禽流感免疫的出口家禽,以及因其他特殊原因不免疫的,有关养殖场(户)逐级报省级农业农村部门同意后,可不实施免疫。
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在PCR反应早期,产生荧光的水平不能与背景明显地区别,而后荧光的产生进入指数期、线性期和终的平台期,因此可以在PCR反应处于指数期的某一点 上来检测PCR产物的量,并且由此来推断模板初的含量。为了便于对所检测样本进行比较,在real-time Q-PCR反应的指数期,首先需设定一定荧光信号的域值,一般这个域值(threshold)是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 (baseline),荧光域值的缺省设置是3~15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。如果检测到荧光信号超过域值被认为是真 正的信号,它可用于定义 样本的域值循环数(Ct)。Ct值的含义是:每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。研究表明,每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的 对数存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,因此只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样 品的起始拷贝数。
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Taq酶的酶动力与扩增效率有关。一般热启动Taq酶的酶动力越强,PCR扩增的指数增长期越长,‘S型’曲线更加典型,荧光信号值更高,而且更适合做多重PCR检测。我们曾比较过多家公司的热启动Taq酶,在国外品牌中,英国Bioline公司的热启动Taq酶,酶动力较好,可做4重PCR,等量起始模板CT30时的荧光信号值高。在国内品牌中,BIOG热启动Taq酶的指数期较长,可做3重PCR,且扩增曲线的‘S’型不受影响,其它的国产品牌一般只能支持2重反应,在做3重反应时,扩增曲线低矮,荧光信号值较低,无典型扩增曲线,结果很难判定。