上海市分子诊断试剂原材料优质

Taq酶的酶动力与扩增效率有关。一般热启动Taq酶的酶动力越强，PCR扩增的指数增长期越长，‘S型’曲线更加典型，荧光信号值更高，而且更适合做多重PCR检测。我们曾比较过多家公司的热启动Taq酶，在国外品牌中，英国Bioline公司的热启动Taq酶，酶动力较好，可做4重PCR，等量起始模板CT30时的荧光信号值高。在国内品牌中，BIOG热启动Taq酶的指数期较长，可做3重PCR，且扩增曲线的‘S’型不受影响，其它的国产品牌一般只能支持2重反应，在做3重反应时，扩增曲线低矮，荧光信号值较低，无典型扩增曲线，结果很难判定。

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热启动Taq酶的产生：在PCR的反应过程中，主要有三个阶段：变性、复性、延伸。Taq DNA聚合酶的复性温度是72℃，但其在低温下也有活性（活性较弱），也能催化引物与模板复性，只是错配率高，发生非特异性复性机率大。这样在未达到72℃之前，反应在Taq酶聚合下不断扩增出非特异性产物，而使实验失败。在传统的PCR反应中，这样由低温上升至高温的过程中，引物错配和二聚体的形成机率非常高，Hot Start Taq DNA聚合酶就是让PCR反应一开始就在大于70℃下进行。当温度较低时，酶活性被封闭，当温度大于一定温度时酶又开始工作。这样就避免了在低温下复性、延伸的过程，消除引物错配和二聚体形成，减少非特异性产物的产生。我们是如何对Hotstart Taq酶修饰而让它只在高温下才能发挥活性？这就是Hot Start taq酶的作用原理。

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热启动 Taq 酶的应用：PCR 能够快速特异的扩增任何已知的 DNA 片段，因此被广泛的应用于分子生物学的各个领域。Relia 热启动酶因具有 5’-3’核酸外切酶活性，可用于荧光定量 PCR 反应。采用热启动法扩增是提高 PCR 特异性的常用方法，热启动酶是很好的选择。除此之外，因其具有的高特异性高灵敏度被广泛应用到各个方面：构建 cDNA 文库，产生大量 DNA 测序，突变体分的析构建，基因分离，遗传病诊断，法医鉴定等。

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选择灵敏度高的热启动Taq酶。一般说，Taq酶的扩增效率高，灵敏度就高，但也有不一致的情况。如果要扩增的样本目标基因丰度较低，建议对Taq酶的扩增灵敏度进行检测。常见的检测方法是将目标基因质粒片段进行10倍或5倍梯度稀释，在较低的几个稀释度进行PCR检测，选择检测灵敏度较高的热启动Taq酶。目前国内市场上常用的ABI、Bioline、Biog的扩增灵敏度都比较高，但知名品牌T的灵敏度略低，研究者可根据自身的实验要求进行选择。

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分子诊断仪器主要包括核酸提取仪、PCR 扩增仪、核酸分子杂交仪、基因芯片仪和基因测序仪等。在技术相对容易攻破的中端仪器领域，如核酸提取仪、PCR 扩增仪、核酸分子杂交仪、基因芯片仪国产化已经成型，国产产品占据了主要市场，而 基因测序仪的国产化进程正在发起突围，主要表现为三种方式： （1）并购国外的测序仪公司，在其核心技术的基础上推出自主品牌的测序仪，以华大基因为代表。（2）利用内生科研能力自主研发，以华因康基因、紫鑫药业等公司为代表。（3）与国外知名测序仪生产企业合作，在其测序仪原型的基础上加以改造，形成具有特殊用途的自主品牌的测序仪，代表公司是贝瑞和康、达安基因和博奥生物等。