伊春市热启动Taq酶研发

实时荧光定量pcr仪，由荧光定量系统和计算机组成，用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异。正常化后可以设定域值水平，这就是分析荧光数据的水平。

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选择灵敏度高的热启动Taq酶。一般说，Taq酶的扩增效率高，灵敏度就高，但也有不一致的情况。如果要扩增的样本目标基因丰度较低，建议对Taq酶的扩增灵敏度进行检测。常见的检测方法是将目标基因质粒片段进行10倍或5倍梯度稀释，在较低的几个稀释度进行PCR检测，选择检测灵敏度较高的热启动Taq酶。目前国内市场上常用的ABI、Bioline、Biog的扩增灵敏度都比较高，但知名品牌T的灵敏度略低，研究者可根据自身的实验要求进行选择。

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热启动PCR（hot start PCR）是指使Taq DNA 聚合酶只有在样品温度至少超过70℃时才发挥作用的PCR，可提高反应的特异性。Taq DNA 聚合酶通常在比适宜温度低得多的条件下仍有较强的活性。PCR 反应的初加热过程中，样品温度上升到70℃之前，在较低的温度下引物可能与部分单链模板形成非特异性结合，并在Taq DNA 聚合酶的作用下延伸。结果会导致非靶序列的扩增，影响反应的特异性。热启动可减少非靶序列的扩增，提高反应的特异性。在引物设计时如果某位点因为遗传元件的定位而受限，如site-directed 突变、表达克隆或用于DNA 工程的遗传元件的构建和操作等情况，热启动PCR 尤为有效。

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动物为什么要打预防针：主要是预防和控制传染病的发生。传染病的发生具备传染源、传染途径和易感动物三个环节，缺一不可。在防疫中，切断任何一个环节，传染即告终止。打预防针是将有效的生物制品（疫苗、菌苗、类毒素）作为抗源，引入动物机体，或注入免疫血清，以激发动物机体产生特异性抵抗力，使易感动物转化为不易感动物的一种手段，由于过去通常采用注射法，所以人们习惯上把免疫接种称为打预防针。有组织、有计划地进行免疫接种，是预防和控制动物传染病发生流行的重要措施之一，在某些传染病如禽流感、口蹄疫、猪瘟等病的防控措施中，免疫接种更具有关键性的作用。所以，打预防针是为养殖业保驾护航，可以避免疫病发生，减少死亡损失，使养殖业增收。

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常用的动物检疫方法:常用的动物检疫方法有临床检查、实验室检验等方法。临床检查方法主要看动物的表现(静、动、卧、起、立、精神、食欲等)是否正常，体温、脉搏、呼吸等是否在正常生理指标范围内。实验室检验则依照农业部颁布的动物检疫操作规程规定的检疫方法和判定标准执行。①产地检疫。是指动物离开饲养产地之前的检疫。②屠宰检疫。是指在宰前、宰后及屠宰过程中，对动物及动物产品所实施的检疫。包括宰前检疫②屠宰检疫。是指在宰前、宰后及屠宰过程中，对动物及动物产品所实施的检疫。包括宰前检疫和宰后检疫两个环节。③检疫证明。是指检疫机关给检疫合格的动物、动物产品出具的法律书证。现行农业部统一监制、发放和使用的检疫证明包括《动物检疫合格证明》、《动物产品检疫合格证明》、《出县境动物检疫合格证明》、《出县境动物产品检疫合格证明》和《动物及动物产品运载工具消毒证明》5种。

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在PCR反应早期，产生荧光的水平不能与背景明显地区别，而后荧光的产生进入指数期、线性期和终的平台期，因此可以在PCR反应处于指数期的某一点 上来检测PCR产物的量，并且由此来推断模板初的含量。为了便于对所检测样本进行比较，在real-time Q-PCR反应的指数期，首先需设定一定荧光信号的域值，一般这个域值（threshold）是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 （baseline），荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。如果检测到荧光信号超过域值被认为是真 正的信号，它可用于定义 样本的域值循环数（Ct）。Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的 对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，因此只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样 品的起始拷贝数。