佳木斯市实时荧光定量PCR仪应用领域

选择灵敏度高的热启动Taq酶。一般说，Taq酶的扩增效率高，灵敏度就高，但也有不一致的情况。如果要扩增的样本目标基因丰度较低，建议对Taq酶的扩增灵敏度进行检测。常见的检测方法是将目标基因质粒片段进行10倍或5倍梯度稀释，在较低的几个稀释度进行PCR检测，选择检测灵敏度较高的热启动Taq酶。目前国内市场上常用的ABI、Bioline、Biog的扩增灵敏度都比较高，但知名品牌T的灵敏度略低，研究者可根据自身的实验要求进行选择。

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相对分子质量为94的Taq DNA聚合酶的活性较高，大约为200000 U/mg，在合成DNA时有一个较高的适温度75～80℃。Taq DNA聚合酶虽然在90℃以上合成DNA的能力有限，但高温时仍比较稳定。有实验证明，在92.5℃、95℃和97.5℃时，PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分别经130 min、40 min和5～6 min后，仍可保持百分之50左右的活性，其半衰期较长。所以，在一个PCR预备试验中，每次循环时上限温度为95℃处理20S，则循环50次后Taq DNA聚合酶仍可保持百分之65的活性，能够保证实验的需要。

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Taq酶的酶动力与扩增效率有关。一般热启动Taq酶的酶动力越强，PCR扩增的指数增长期越长，‘S型’曲线更加典型，荧光信号值更高，而且更适合做多重PCR检测。我们曾比较过多家公司的热启动Taq酶，在国外品牌中，英国Bioline公司的热启动Taq酶，酶动力较好，可做4重PCR，等量起始模板CT30时的荧光信号值高。在国内品牌中，BIOG热启动Taq酶的指数期较长，可做3重PCR，且扩增曲线的‘S’型不受影响，其它的国产品牌一般只能支持2重反应，在做3重反应时，扩增曲线低矮，荧光信号值较低，无典型扩增曲线，结果很难判定。

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做好经费支持。按照《财政部、农业农村部关于修订印发农业相关转移支付资金管理办法的通知》（财农〔2020〕10号）要求，对国家确定的强制免疫病种，财政切块下达补助资金，统筹支持各省份开展强制免疫、免疫效果监测评价、疫病监测和净化、人员防护，以及实施强制免疫计划、购买防疫服务等。开展宣传培训。各省份要充分利用各类媒体，加大国家动物疫病强制免疫政策的宣传力度，提升养殖者自主免疫意识，提高科学养殖和防疫水平。要制定动物免疫病种的免疫培训方案，定期开展技术培训，指导相关人员科学开展免疫，加强个人防护。

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动物传染病的预防措施:.①加强科:学的饲养管理，增强机体抗病能力。②加强检疫。对引种、畜禽集贸市场、畜禽屠宰场的动物及动物产品进行严格检疫。严禁染疫动物及动物产品的流通。对检疫时发现的染疫动物及动物产品应按国家的有关规定进行无害化处理。③预防消毒。开展经常性的消毒，可以有效地杀灭外界环境中的病原体，从而达到预防传染病发生的目的。④预防接种。通过对动物进行免疫接种疫苗，增强其对某些疫病的特异性抵抗力，是防止动物疫病发生的一个很重要的有效措施。⑤药物预防。在日粮和饮水中加人适量抗生素或驱虫药，以达到预防疾病发生的目的。